Свойства белков в изоэлектрическом состоянии. Методы определения изоэлектрической точки белков.
Химия | ||
Решение задачи | ||
Выполнен, номер заказа №16875 | ||
Прошла проверку преподавателем МГУ | ||
Напишите мне в чат, пришлите ссылку на эту страницу в чат, оплатите и получите файл! |
Закажите у меня новую работу, просто написав мне в чат! |
Свойства белков в изоэлектрическом состоянии. Методы определения изоэлектрической точки белков.
Ответ: Белки имеют в своём составе радикалы лизина, аргинина, гистидина, глутаминовой и аспарагиновой кислот, содержащие функциональные группы, способные к ионизации (ионогенные группы). Кроме того, на N- и С-концах полипептидных цепей имеются α-амино- и α-карбоксильная группы, также способные к ионизации. В кислой среде увеличение концентрации протонов (Н+ ) приводит к подавлению диссоциации карбоксильных групп и уменьшению отрицательного заряда белков: В щелочной среде связывание избытка ОНс протонами, образующимися при диссоциации NH3 + с образованием воды, приводит к уменьшению положительного заряда белков: Значение рН, при котором белок приобретает суммарный нулевой заряд, называют "изоэлектрическая точка" и обозначают как pI. В изоэлектрической точке количество положительно и отрицательно заряженных групп белка одинаково, т.е. белок находится в изоэлектрическом состоянии. Так как большинство белков в клетке имеет в своём составе больше анионогенных групп (-СОО- ), то изоэлектрическая точка этих белков лежит в слабокислой среде. Изоэлектрическая точка белков, в составе которых преобладают катионогенные группы, находится в щелочной среде. Наиболее яркий пример таких внутриклеточных белков, содержащих много аргинина и лизина, - гистоны, входящие в состав хроматина. Изоэлектрическая точка - одна из важнейших характеристик белка. Все существующие методы её определения основаны на измерении свойств белков, связанных или с конформацией макромолекулы, или с их зарядом, при различных значениях рН. Во всех случаях готовится серия буферных растворов с различными значениями рН, в которые помещаются одинаковые количества исследуемого белка в виде раствора или в сухом виде. Электрофоретический метод. ИЭТ можно определить с помощью электрофореза на бумаге. В прибор для электрофореза на бумаге вставляется несколько полосок фильтровальной или специальной хроматографической бумаги и каждая из них смачивается буферным раствором с определённым значением рН. На заранее отмеченное карандашом место в середине полосок пипеткой наносится капля раствора исследуемого белка. После этого прибор включается и через полоски бумаги с растворами проходит постоянный электрический ток. В зависимости от рН буферного раствора макромолекулы изменяют свой заряд. В средах с рН > ИЭТ они заряжаются отрицательно, а в средах с рН < ИЭТ – положительно. В растворе с рН, равным ИЭТ, макромолекулы белка приобретут нейтральный заряд. Таким образом, в электрическом поле макроионы будут перемещаться в различных направлениях, а нейтральные цвиттер-ионы останутся на месте в соответствии со схемой: Через какое-то время ток выключают, полоски бумаги высушивают и проявляют пятна белка, опрыскивая их раствором нингидрина. рН буферного раствора той полоски, на которой пятно белка осталось в том же месте, куда была нанесена капля, соответствует изоэлектрической точке белка. В изоэлектрическом состоянии макромолекулы из-за минимального заряда обычно свернуты в клубки и наименее гидратированы. Это лежит в основе других методов, из которых наиболее надёжным и простым в исполнении является метод определения ИЭТ по минимуму вязкости. В этом случае с помощью вискозиметра измеряется относительная вязкость серии буферных растворов с добавлением одинакового количества белка. Из-за свёрнутости макромолекул белка, находящегося в изоэлектрическом состоянии, в наиболее плотные глобулы, наименьшей вязкостью будет обладать раствор с рН = ИЭТ. Метод, связанный с действием водоотнимающих средств. Макромолекулы белков в изоэлектрическом состоянии наименее всего гидратированы. Поэтому выделение белков из раствора под действием водоотнимающих средств (например, спирт, ацетон в чистом виде или в присутствии нейтральных солей) происходит быстрее и полнее всего при рН, соответствующем изоэлектрической точке. Изоточка может быть определена и другими способами – по скорости застудневания, по степени набухания сухого белка и т. д. Однако эти методы не очень точны и требуют намного большего количества белка для исследования, что не всегда доступно.
Похожие готовые решения по химии:
- По приведенным данным построить диаграмму кипения для системы четыреххлористый углерод (ССl4) – этанол (С2Н5ОН) в координатах "температура-состав" при р= const
- Рассчитать удельную электрическую проводимость 0,16 М раствора пропионовой кислоты при t=25 0С (Кд(C2H5COOH) = 1,34*10-5). Предельные эквивалентные электрические проводимости ионов
- Для определения рН желчи (из желчного пузыря) была составлена цепь из водородного и хлорсеребряного электродов, ЭДС которой оказалась равной 0,577 В при T=298К. Концентрация
- 1 г угля имеет активную поверхность, равную 1000 м3 , и может адсорбировать 0,448 л (н.у.) ядовитого газа фосгена. Сколько молекул фосгена
- К 100 мл 0,03%-ного раствора NaCl (плотность 1г/мл) добавили 250 мл 0,001М раствора AgNO3. Напишите формулу мицеллы золя. Какой из перечисленных электролитов вызовет коагуляцию этого золя
- На основании данных осмометрического метода, полученных при данной температуре Т, рассчитать молярную массу полистирола в толуоле. R = 8,31*103 Дж/К кмоль; [М] = кг
- Криоскопическая и эбулиоскопическая постоянные, их физический смысл. Способы определения.
- Порошки, их свойства. Порошки как дисперсные системы. Методы получения порошков. Гранулирование порошков. Гигроскопичность и смачиваемость. Слеживаемость при хранении
- В состав трех изделий входят платы 22-29, которые находятся на самом нижнем уровне сборки. Из этих элементов
- Порошки, их свойства. Порошки как дисперсные системы. Методы получения порошков. Гранулирование порошков. Гигроскопичность и смачиваемость. Слеживаемость при хранении
- Расчет коэффициента конкордации, ранговых коэффициентов корреляции и определение их значимости
- По приведенным данным построить диаграмму кипения для системы четыреххлористый углерод (ССl4) – этанол (С2Н5ОН) в координатах "температура-состав" при р= const